該實(shí)驗(yàn)利用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定葡萄酒中的甜蜜素，并對(duì)葡萄酒中甜蜜素提取方法作了改進(jìn)，采取直接離心而無(wú)需將存在于正己烷中的環(huán)己醇亞硝酸酯取出后再離心，簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程，縮短了分析時(shí)間。  

一、材料與方法 
1.儀器和試劑 
氣相色譜-質(zhì)譜儀,氣相色譜儀,帶FID，配備7683自動(dòng)進(jìn)樣器和增強(qiáng)型化學(xué)工作站；CENMTRIKONT-124高速冷凍離心機(jī).正己烷（分析純，用全玻璃蒸餾裝置重蒸餾）、氯化鈉（分析純百分之650灼燒4h）、三重蒸餾水。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer公司）用三重蒸餾水配制成10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。 
2.色譜、質(zhì)譜分析條件 
氣相色譜采用DB-1毛細(xì)管色譜柱，30m×0.25mm×0.25um（膜厚），分流/不分流進(jìn)樣口，進(jìn)樣口溫度l5O攝氏度，脈沖不分流進(jìn)樣；載氣：高純氮?dú)猓兌劝俜种?9.999），流速1.0ml/min；程序升溫：5O攝氏度保留0.75min，以45攝氏度/min升至95攝氏度，保留1min，再以40攝氏度/min升至115攝氏度，保留0.5min，再以3O攝氏度/min升至145攝氏度，保留1.25min，全部程序時(shí)間6.0min；FID溫度200攝氏度，氫氣：30ml/min，空氣：400ml/min，補(bǔ)償氣：氮?dú)猓魉贋?5ml/min；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量ul。 
質(zhì)譜采用EI方式：EM電壓為自動(dòng)調(diào)諧值，電離能量7OeV，離子源溫度230攝氏度，四極桿溫度l5O攝氏度，接口溫度280攝氏度；掃描方式：全掃描，掃描質(zhì)量（m/z）范圍：5O～300；溶劑延遲時(shí)間為2.6min。采用HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，30m×0.25mm×0.25um（膜厚），分流/不分流進(jìn)樣El，進(jìn)樣El溫度200攝氏度，脈沖不分流進(jìn)樣；載氣：高純氦氣（純度百分之99.999），流速1.0ml/min；程序升溫：60攝氏度保留lmin，以1O攝氏度/min升至100攝氏度，再以40攝氏度/min升至180攝氏度，全部程序時(shí)間7.0min；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量ul。 
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 
分別準(zhǔn)確吸取10ms/ml甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.02、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0ml于100ml具塞聚乙烯離心管，加水至2Oml，置冰浴中，然后按1.4自“加入5ml5Og/L亞硝酸鈉溶液”起操作。當(dāng)葡萄酒取樣量為2O.0g時(shí)，分別相當(dāng)于0.O1、0.05、0.25、0.50、1.00、2.5Og/kg。以甜蜜素的濃度為橫坐標(biāo)（x），相對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）得出回歸方程：Y為7432.1X-3O.8，r為0.99987。 
4.樣品處理 
準(zhǔn)確稱(chēng)取20.0g去除酒精的葡萄酒樣品于100ml具塞聚乙烯離心管，置冰浴中，加入5ml5Og/L亞硝酸鈉溶液，5ml100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10ml正己烷，5g氯化鈉，振搖8O次，然后4000r/min離心10min，用吸管取出上層正己烷供氣相色譜分析。
 
二、結(jié)果和討論 
1.樣品處理方法的改進(jìn) 
GB/T5009.97-2003中的樣品處理方法為：準(zhǔn)確稱(chēng)取20.0g去除酒精的葡萄酒樣品于100ml帶塞比色管中，置冰浴中，加入5ml5Og/L亞硝酸鈉溶液，5ml100s/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10ml正己烷，5g氯化鈉，振搖8O次，待靜置分層后吸出上層正己烷于10ml帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，上層正己烷供氣相色譜分析。在實(shí)際測(cè)定中，由于樣品處理過(guò)程中產(chǎn)生大量的泡沫，靜置后易形成乳化，無(wú)法分層，很難吸出上層正己烷。本文采用1.4樣品前處理方法，簡(jiǎn)化了操作步驟，縮短了樣品前處理的時(shí)間，同時(shí)解決了乳化不分層的難題。 
2.實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng) 
樣品處理過(guò)程中，加入5ml50g/L亞硝酸鈉溶液，5ml100g/L硫酸溶液，搖勻，應(yīng)注意開(kāi)始振搖時(shí)應(yīng)緩慢，并不時(shí)打開(kāi)離心瓶蓋放氣，以免離心瓶蓋被沖開(kāi)，液體飛濺，造成人身?yè)p害及實(shí)驗(yàn)事故。 

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