酶是應(yīng)該保存在-20℃還是-80℃？
更新時(shí)間：2025-03-11 點(diǎn)擊次數(shù)：3023
酶是一種蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性會(huì)受多種因素的影響，如pH，離子濃度，保護(hù)劑等等。其中溫度是影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性最主要的因素之一，通常情況下低溫保存應(yīng)該可以減緩酶的降解過(guò)程。那么對(duì)于酶的保存，是選擇-20℃還是-80℃呢？
我記得實(shí)驗(yàn)室里通常用的冰箱溫度是-20℃，而超低溫冰箱是-80℃。可能不同的酶有不同的要求。比如有些酶可能對(duì)溫度更敏感，需要更低的溫度來(lái)保持活性。不過(guò)為什么會(huì)有這樣的差異呢？1，酶的結(jié)構(gòu)。高溫會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，但低溫下是否也會(huì)有影響？冷凍過(guò)程中，水分會(huì)形成冰晶，冰晶的大小和數(shù)量可能影響酶的結(jié)構(gòu)。-80℃下，冰晶形成較小，對(duì)酶結(jié)構(gòu)的破壞可能更少，而-20℃可能形成較大的冰晶，導(dǎo)致酶結(jié)構(gòu)受損。這可能是為什么有些酶需要-80℃保存的原因之一。另外，反復(fù)凍融可能破壞結(jié)構(gòu)，所以保存溫度的選擇不僅要看溫度，還要看是否經(jīng)常需要取用。2，保存時(shí)間。如果需要長(zhǎng)期保存，比如幾個(gè)月甚至幾年，-80℃可能更合適，因?yàn)楦偷臏囟瓤梢赃M(jìn)一步減慢酶的降解速度。而短期保存可能用-20℃就足夠了。3，酶的形式也可能影響保存條件。比如液體狀態(tài)和凍干粉狀態(tài)。凍干粉可能在-20℃下更穩(wěn)定，而液體酶可能需要更低的溫度，尤其是如果含有容易分解的成分的話。甘油常用來(lái)防止冰晶形成，可能在 - 20℃下就能有效保護(hù)酶，而如果沒(méi)有甘油，可能需要更低的溫度。有些酶可能需要特定的緩沖液或保護(hù)劑來(lái)維持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，這時(shí)候保存溫度的選擇也會(huì)不同。4，成本問(wèn)題。-80℃的冰箱更貴，運(yùn)行成本更高，耗電更多。所以如果不需要長(zhǎng)期保存或者酶的穩(wěn)定性足夠好，可能實(shí)驗(yàn)室會(huì)選擇-20℃來(lái)節(jié)省成本。這也可能是一些常用酶保存在-20℃的原因。5，運(yùn)輸過(guò)程中的溫度。有些酶在運(yùn)輸時(shí)可能用干冰，也就是-78℃左右，接近-80℃，所以如果長(zhǎng)期保存在-80℃，可能更符合運(yùn)輸條件，減少溫度波動(dòng)帶來(lái)的影響。而如果實(shí)驗(yàn)室收到酶后轉(zhuǎn)移到-20℃，可能會(huì)有溫度變化，導(dǎo)致酶活性的損失。6，不同類(lèi)型的酶可能有不同的要求。比如Taq酶用于PCR，通常保存在-20℃，而某些更敏感的酶比如逆轉(zhuǎn)錄酶或者連接酶可能需要-80℃?？赡苌a(chǎn)商的推薦也很重要，不同廠商可能有不同的建議，基于他們的穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果。7，酶自身的穩(wěn)定性。有些酶在-20℃下可能容易發(fā)生自降解或受到蛋白酶污染，而-80℃可以幾乎玩全停止這些過(guò)程。特別是如果酶溶液中存在微量的蛋白酶，低溫可以抑制其活性，從而保護(hù)目標(biāo)酶。有些酶可能在低溫下更容易聚集或沉淀，這時(shí)候可能需要特定的保存條件?；蛘?，某些酶可能對(duì)溫度變化更敏感，需要更嚴(yán)格的控制。8，反復(fù)凍融的問(wèn)題。如果酶需要頻繁使用，保存在-20℃可能更方便，因?yàn)槊看稳〕龊罂赡茉?20℃下只是部分凍結(jié)，而-80℃的酶可能需要更長(zhǎng)時(shí)間解凍，或者反復(fù)凍融的次數(shù)多了會(huì)影響穩(wěn)定性。這時(shí)候分裝保存可能更重要，不管是-20還是-80，分裝成小份可以減少反復(fù)凍融的影響。9，添加劑的影響。比如有些酶保存液中含有甘油，使其在-20℃不凍結(jié)，這樣酶處于液態(tài)但低溫，可能更穩(wěn)定。而如果保存在-80℃，甘油濃度可能需要調(diào)整，否則會(huì)凍結(jié)，反而可能影響穩(wěn)定性。或者有些保存液中添加了穩(wěn)定劑，如BSA、DTT等，這些成分在不同溫度下的穩(wěn)定性也可能影響保存條件的選擇。10，微生物污染的可能性。更低的溫度可能更有效地抑制微生物的生長(zhǎng)，雖然-20℃已經(jīng)很低，但某些耐低溫的微生物可能仍有活動(dòng)，而-80℃幾乎可以玩全抑制。不過(guò)這種情況可能比較少見(jiàn)，因?yàn)槊竿ǔＪ窃跓o(wú)菌條件下保存的，但也不能玩全排除污染的可能性。總的來(lái)說(shuō)，需要綜合考慮多種因素來(lái)決定酶的最佳保存溫度，這些因素包括：酶的類(lèi)型和穩(wěn)定性、保存時(shí)間的長(zhǎng)短、是否頻繁使用、保存形式（液體或凍干粉）、添加劑的存在、成本考慮、生產(chǎn)商的建議以及防止反復(fù)凍融的措施。
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